4. 用轉(zhuǎn)棒儀測量動物的運動協(xié)調(diào)/平衡

對于所有試驗，在試驗前30 min將小鼠帶到實驗室，以確保它們完全清醒。一般來說，為了讓肌肉力量和覺醒水平恢復(fù)到正常，在每次運動測試后都放回到籠子里，讓小鼠休息。

4.1 加速旋轉(zhuǎn)版本測試

1)捏住小鼠尾巴后1/3處，將小鼠放在靜止的旋轉(zhuǎn)桿上，背向桿旋轉(zhuǎn)的方向，每個通道里都放一只小鼠。

2)啟動轉(zhuǎn)棒，并同時開始自動計時。一般加速度設(shè)置為20 rpm/min。

3)當小鼠從旋轉(zhuǎn)桿上掉下來時，如果可能的話，及時將它從設(shè)備里取出，然后放回籠子里。

4)在5 min結(jié)束時，將所有仍然保持在桿上的小鼠移到飼養(yǎng)籠里。

5)記錄小鼠從旋轉(zhuǎn)桿上跌落下來的潛伏期（小鼠停留在旋轉(zhuǎn)桿上的時間），如果它們成功完成了整個測試周期，則記錄*大分數(shù)300秒。

6)通常，理想的方法是進行多次試驗，重復(fù)試驗兩到三次，每次至少間隔15 min。

7)計算出這些試驗得分的平均值。這是一種典型的方法，但如果對每個單獨試驗的表現(xiàn)都很感興趣，也可以使用原始形式的數(shù)據(jù)。

8)采用非配對t檢驗分析兩組動物在單個試驗數(shù)據(jù)或平均試驗的單個數(shù)據(jù)集的差異。

9)如果對一系列試驗的表現(xiàn)感興趣，則需要進行多因素方差分析（ANOVA），包括一個受試者內(nèi)因素（試驗次數(shù)、**劑量或重復(fù)測量設(shè)計中的其他測試條件）和任何受試者間因素（例如，腦區(qū)損毀、基因型或小鼠之間不同的**）。對于縱向研究，將增加一個額外的受試者內(nèi)因素（時間點或年齡）。

4.2 定速旋轉(zhuǎn)版本測試

1)將旋轉(zhuǎn)桿的速度設(shè)置在所需的*低速度。

2)將小鼠放在旋轉(zhuǎn)桿上，每個通道里都放上一只小鼠。

3)啟動轉(zhuǎn)棒，并同時開始自動計時，測試時間*長1min。

4)當小鼠從旋轉(zhuǎn)桿上掉下來時，如果可能的話，及時將它從設(shè)備里取出，然后放回籠子里。

5)當所有小鼠完成1 min的試驗后，移出它們，然后放回到飼養(yǎng)籠里。

6)記錄下小鼠能夠保持在旋轉(zhuǎn)桿上的潛伏期時間。

7)每個試驗之間至少間隔5 min。

8)將設(shè)備重置到下一個要使用的速度。

9)重復(fù)步驟2）至8），直到對所有所需的旋轉(zhuǎn)桿速度進行完試驗為止。

10)通常需要進行多次試驗。在*小間隔15 min后，以新的上升速度系列重復(fù)測試。

11)計算這些試驗得分的平均值。這是一種典型的方法，但如果每個試驗的表現(xiàn)都感興趣，請使用原始形式的數(shù)據(jù)。

12)如果只使用單個速度來確定兩組小鼠之間的差異，則應(yīng)用非配對t檢驗。對于多個速度，應(yīng)用至少一個受試者內(nèi)部因素（桿速度）和通常至少一個受試者間因素（例如，基因型或損毀組）的方差分析。

13)**或其他**將在分析中提供第三個處理因素，受試者內(nèi)因素或受試者間因素取決于采用的是重復(fù)測量還是隨機設(shè)計。對于縱向研究，還需要**個受試者內(nèi)變量（時間點）。

數(shù)據(jù)收集和評價指標

大多數(shù)方案要么測試動物在給定的時間內(nèi)停留的*大速度，要么測試動物在不同速度下跌落所需的時間。商業(yè)轉(zhuǎn)棒儀可以自動記錄動物的跌落潛伏期（動物保持在桿上的時間）和跌落時的旋轉(zhuǎn)速度，這是動物運動協(xié)調(diào)性的主要指標，尤其是前者。同時還能記錄試驗結(jié)束的原因，跌落、跳躍或被動旋轉(zhuǎn)。一些研究也應(yīng)用了額外的或替代的指標，例如運動的距離，在規(guī)定的持續(xù)時間內(nèi)在旋轉(zhuǎn)桿上保持平衡的動物數(shù)量，或在實驗運行期間從旋轉(zhuǎn)桿上跌落和動物抓住桿被動旋轉(zhuǎn)的次數(shù)。另外，可以以日期為橫坐標，潛伏期為縱坐標繪制初始實驗期間的任務(wù)學(xué)習(xí)曲線，通常隨著每日訓(xùn)練任務(wù)表現(xiàn)顯著提高。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

根據(jù)研究人員的經(jīng)驗，在轉(zhuǎn)棒測試中，大約8只動物的樣本量就能提供足夠的能力來檢測組平均值中10%到15%的差異。對于方差的統(tǒng)計同質(zhì)性，小鼠的數(shù)量至少不應(yīng)低于6只。

根據(jù)需要對數(shù)據(jù)進行方差分析，在適當?shù)那闆r下，使用組間重復(fù)測量比較。對于事后分析，Tukey HSD測試用于確定組之間的成對差異，Dunnetts測試用于確定給定數(shù)據(jù)集與該數(shù)據(jù)集的控制值之間的顯著差異。當存在顯著的相互作用時，使用Sidak檢驗在組間進行一系列獨立的事后兩兩比較。差異在P ＜0.05時被認為是顯著的。數(shù)據(jù)以平均值±標準誤表示。

注意事項

1.小鼠五到八只為一籠，飼養(yǎng)在溫度，濕度和光受控的環(huán)境中。保持12小時光/暗循環(huán)，早上8點亮燈。飼養(yǎng)室和實驗室的溫度保持在20 ± 2°C, 相對濕度為60%。除非在實驗過程中，平時小鼠可以隨意獲得食物和水。盡一切努力盡量減少動物的數(shù)量及其痛苦。

2.在行為測試之前，撫摩大鼠和小鼠是很重要的（所有組中的所有動物都以相同的方式撫摩到相同的程度）。這將使動物克服會對表現(xiàn)產(chǎn)生重大影響的自然恐懼和焦慮反應(yīng)。

3.在測試開始之前，將動物送至行為測試室，讓它們不受干擾地適應(yīng)30分鐘，然后稱重并記錄。測試可以在上午8點至下午4點之間進行，重要是是保持不同測試日的測試時間點一致。

4.不同小鼠品系獲得穩(wěn)定的基線表現(xiàn)水平所需的訓(xùn)練量有所不同，但長時間暴露于逐漸增加的旋轉(zhuǎn)速度的一般原則是適用的。在訓(xùn)練過程中，如果該方案對所使用的特定小鼠品系來說太累，可能有必要允許小鼠休息，休息15分鐘通常是足夠的。

5.所需的試驗次數(shù)可能因使用的小鼠品系而有所不同。在腦區(qū)損毀或遺傳性**模型的小鼠中，建議進行一次以上的試驗，因為單個實驗動物的分數(shù)通常有更大的差異。類似地，在縱向研究中，如果小鼠有一段時間沒有進行過測試了，**次試驗可以作為提醒，在這種情況下，可能需要3次或4次試驗，可采用后2次或3次數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)分析。

6.實驗時轉(zhuǎn)棒速度的設(shè)計應(yīng)考慮到**的嚴重程度。應(yīng)該至少有一個較慢的速度，使大多數(shù)小鼠能夠保持在旋轉(zhuǎn)桿上。理想情況下，后續(xù)的速度應(yīng)該產(chǎn)生一個代表**或其他處理因素（如給藥測試）嚴重程度的數(shù)據(jù)曲線。無法進行任務(wù)的比例應(yīng)低于10%。隨著動物在**的后期變得更加虛弱，這種情況可能會增加。

7.*好在開始研究之前選擇重新測試的頻率。例如，如果正在研究一種測試化合物的短期影響，那么一次測試可能就足夠了。然而，如果正在調(diào)查復(fù)合**、損毀或其他**的長期影響，或者如果確定慢性表型，*好在幾周內(nèi)每周進行重新測試，或連續(xù)幾個月每月進行重新測試。因此，在開始主要研究之前，通常需要進行預(yù)實驗來確定適當?shù)膶嶒炘O(shè)計、測試頻率、發(fā)病年齡和表型持續(xù)時間。

8.一定要在每只被測試小鼠之間對設(shè)備進行清潔和**。小鼠經(jīng)常在旋轉(zhuǎn)桿上小便和排便。桿子上的尿液和糞便會損害其他測試小鼠的表現(xiàn)。因此，經(jīng)常清洗儀器是很重要的。

9.實驗室環(huán)境在測試期間應(yīng)保持溫度、濕度和光強度不變。

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