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動(dòng)物焦慮行為實(shí)驗(yàn)手冊(cè)丨高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試方法、指標(biāo)評(píng)價(jià)及注意事項(xiàng)


高架十字迷宮(Elevated Plus Maze, EPM)是一種在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域中被廣泛用于焦慮與其相關(guān)癥狀研究的行為實(shí)驗(yàn),此種實(shí)驗(yàn)充分利用了嚙齒動(dòng)物不喜歡開(kāi)闊地并盡可能的去追求遮蔽的天性。高架十字迷宮為一個(gè)擁有四種選擇的迷宮,其中兩個(gè)方向?yàn)殚_(kāi)闊且無(wú)圍墻保護(hù)的空間(Open Arms) ,而另外兩個(gè)為封閉空間(Close Arms) ,動(dòng)物在天性驅(qū)使之下會(huì)去追求遮蔽,因此會(huì)在擁有遮蔽的封閉臂待上較久的時(shí)間,利用老鼠害怕開(kāi)闊地的天性進(jìn)而觀察其焦慮或恐懼所造成的行為。


高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)J降碾r型是由 KC Montgomery于 1955年所創(chuàng)立的,他使用了改裝過(guò)的Y字迷宮(Y-Maze) ,與現(xiàn)今的Y字迷宮不同的是他所使用的迷宮分別擁有一個(gè)開(kāi)闊臂與封閉臂,動(dòng)物馬上就會(huì)對(duì)這兩臂有著直接的喜好與厭惡而無(wú)需特定誘因 。基于這樣的結(jié)果,  Handley and Mithani  ( Handley & Mithani 1984 )在1984年研發(fā)出了高架十字迷宮,自此高架十字迷宮即成為了研究焦慮成因以及研發(fā)抗焦慮藥的利器。



高架十字迷宮硬體設(shè)備介紹 


標(biāo)準(zhǔn)的高架十字迷宮擁有一個(gè)小型的中間出發(fā)區(qū)域,此區(qū)域有4條向四方延伸的開(kāi)闊/封閉臂,四條臂長(zhǎng)約30-50公分且寬約為5-10公分,彼此間保持90度夾角,實(shí)際的大小由您要使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類而定(大鼠、小鼠甚至是小型靈長(zhǎng)目) 。開(kāi)闊臂與封閉臂采交叉間隔,封閉臂通常擁有高達(dá)40公分但無(wú)天花板的墻面,墻面可以是透明或是霧面 ,至于開(kāi)闊臂的末端建議可以加裝一塊擋板,防止動(dòng)物在開(kāi)闊臂探索時(shí)掉落。迷宮的顏色應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的顏色形成對(duì)比以利觀察或分析 (例如白鼠配深色迷宮) 。整組迷宮需離地至少50公分,防止動(dòng)物從開(kāi)闊臂逃離。

由于封閉臂的墻面可能會(huì)產(chǎn)生陰影,而陰影可能會(huì)影響動(dòng)物本身的視野或行為,因此在架設(shè)高架十字迷宮時(shí)需特別考量燈光的位置,將燈源架設(shè)在迷宮的正上方會(huì)是個(gè)好選擇。使用軌跡追蹤系統(tǒng)(例如VisuTrack軟件,上海欣軟 )并架設(shè)攝影機(jī)時(shí),也需要考量到攝影機(jī)是否能將整個(gè)迷宮映入畫(huà)面中且無(wú)陰影干擾。每只動(dòng)物進(jìn)行新的實(shí)驗(yàn)前,務(wù)必徹底清理迷宮本體,避免上一個(gè)受測(cè)對(duì)象在現(xiàn)場(chǎng)留下了氣味等與實(shí)驗(yàn)不相關(guān)的線索。 


另外還有一種紅外版本的高架十字迷宮,既可以杜絕燈光的復(fù)雜布置,也可以降低光線對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,在實(shí)在迷宮底部鋪設(shè)十字狀紅外面板燈,使用定制的窄波帶寬的攝像機(jī)拍攝,這種方式基本上杜絕了陰影帶來(lái)的干擾,但是相對(duì)成本比標(biāo)準(zhǔn)的高架十字迷宮偏高,用戶可以根據(jù)經(jīng)費(fèi)預(yù)算酌情考慮。如需紅外版本的高架十字迷宮,可以聯(lián)系上海欣軟工程師,詳細(xì)咨詢!




實(shí)驗(yàn)流程說(shuō)明


高架十字迷宮用來(lái)評(píng)估焦慮以及焦慮癥狀。實(shí)驗(yàn)鼠(不管是大鼠還是小鼠)天生都偏好封閉環(huán)境,待在封閉環(huán)境會(huì)帶給它們舒適與**感,因此正常個(gè)體在進(jìn)行高架十字迷宮時(shí)都會(huì)主動(dòng)避免開(kāi)闊臂,即使是在探索階段動(dòng)物也會(huì)避免暴露在開(kāi)闊臂的環(huán)境之下過(guò)久。動(dòng)物在接受了抗焦慮藥品后會(huì)產(chǎn)生焦慮行為減少的現(xiàn)象并且增加探索危險(xiǎn)區(qū)域的頻率,另一方面,動(dòng)物若接受的是促進(jìn)焦慮現(xiàn)象的藥品,則會(huì)大大增加待在封閉臂的時(shí)間(即使是與正常的老鼠相比)  。計(jì)算動(dòng)物花在兩種臂的時(shí)間比即為我們探討動(dòng)物焦慮癥狀嚴(yán)重與否的重點(diǎn)所在。 


與許多需要適應(yīng)甚至重覆訓(xùn)練的迷宮不同,動(dòng)物進(jìn)行高架十字迷宮之前無(wú)需進(jìn)行任何的適應(yīng)或訓(xùn)練,我們要得到的正好是動(dòng)物在不熟悉環(huán)境下本能產(chǎn)生的反應(yīng),不過(guò)在進(jìn)行每次實(shí)驗(yàn)之前,迷宮都需要被徹底清潔并消除氣味,避免不相關(guān)的線索干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。


1、實(shí)驗(yàn)之前,一定要確保高架十字迷宮整個(gè)裝置的清潔。這個(gè)步驟不僅僅是要求當(dāng)天的**實(shí)驗(yàn),更加側(cè)重于每一次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)完成后的清潔除味工作,一定要去除上一只動(dòng)物在宮體內(nèi)**下來(lái)的尿液、糞便等,盡可能創(chuàng)造一個(gè)清潔、無(wú)味道的理想試驗(yàn)環(huán)境。同時(shí),實(shí)驗(yàn)員需要記錄動(dòng)物的編號(hào)、日期、狀態(tài)等信息;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提前運(yùn)送到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室專用臨時(shí)籠架 ,適應(yīng)環(huán)境至少3H左右, 減少動(dòng)物緊張。

2、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(大鼠或者小鼠)從飼養(yǎng)籠中取出,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物盡量背向?qū)嶒?yàn)員,將動(dòng)物輕輕放在儀器宮體的中央?yún)^(qū)域,動(dòng)物面向開(kāi)臂,然后實(shí)驗(yàn)員迅速安靜的離開(kāi);

3、打開(kāi)VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件,設(shè)置好參數(shù),跟蹤動(dòng)物在高架十字迷宮儀器內(nèi)的軌跡運(yùn)動(dòng),自動(dòng)計(jì)算指標(biāo),通常實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)為5min;

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,放入飼養(yǎng)籠,做好實(shí)驗(yàn)完成動(dòng)物的標(biāo)記信息,同時(shí),用酒精和紙巾清潔迷宮。


改進(jìn)型迷宮設(shè)置

高架O字迷宮 (Elevated Zero Maze)的概念與高架十字迷宮相似,不過(guò)并沒(méi)有中央?yún)^(qū)域與四個(gè)方位的設(shè)計(jì),取而代之的是一個(gè)循環(huán)的O型走道,其中分為了2種不同的片段(開(kāi)闊區(qū)與封閉區(qū)) , 此種迷宮消除了方位與臂的選擇,使得學(xué)者們更能專注在探討動(dòng)物對(duì)開(kāi)闊閉的喜好或厭惡。

實(shí)驗(yàn)指標(biāo)

1、進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)(open arm entry,OE):進(jìn)入到任一開(kāi)放臂的次數(shù),以動(dòng)物的四肢均進(jìn)入臂內(nèi)為準(zhǔn)或者以動(dòng)物身體80%進(jìn)入臂內(nèi)為準(zhǔn)。

2、開(kāi)臂活動(dòng)(open arm time,OT):動(dòng)物四肢全部進(jìn)入或者身體80%進(jìn)入開(kāi)臂內(nèi)的持續(xù)時(shí)間,單位:秒。

3、進(jìn)入閉臂次數(shù)(closed  arm  entry,CE):進(jìn)入到任一閉臂的次數(shù),以動(dòng)物的四肢均進(jìn)入臂內(nèi)為準(zhǔn)或者以動(dòng)物身體80%進(jìn)入臂內(nèi)為準(zhǔn)。

4、閉臂活動(dòng)(closed arm time,CT):動(dòng)物四肢全部進(jìn)入或者身體80%進(jìn)入閉臂內(nèi)的持續(xù)時(shí)間,單位:秒。

5、向下探究次數(shù)(head-dipping):實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置身于中央?yún)^(qū)域或者開(kāi)臂時(shí),一邊用前爪握住迷宮邊緣一邊把頭部和肩部伸出開(kāi)臂的邊緣向迷宮下面探究的行為次數(shù)。

6、閉臂后腿直立次數(shù)(rearing):也叫閉臂支撐性站立,動(dòng)物在閉臂前腿抬起以后腿支持身體直立的次數(shù)。

7、中央?yún)^(qū)域活動(dòng):中央?yún)^(qū)域指的是開(kāi)臂和閉臂鏈接交叉的區(qū)域,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在這個(gè)區(qū)域內(nèi)的活動(dòng)路程和滯留時(shí)間。


注意事項(xiàng)


  • 高架十字迷宮通常被用來(lái)進(jìn)行焦慮相關(guān)研究

  • 高架十字迷宮擁有對(duì)稱的開(kāi)闊臂跟封閉臂,彼此以90度夾角

  • 主要記錄動(dòng)物對(duì)于開(kāi)闊臂與封閉臂的偏好相關(guān)數(shù)據(jù)

  • 較不焦慮(或是施以抗焦慮藥品)的動(dòng)物會(huì)進(jìn)行較多次的開(kāi)闊臂探索,且較不易產(chǎn)生焦慮行為

  • 有焦慮癥狀(或是施以焦慮促進(jìn)藥品)的動(dòng)物會(huì)減少探索開(kāi)闊臂的次數(shù)與頻率,且易產(chǎn)生焦慮行為并偏好待在封閉臂

  • 高架十字迷宮很適合使用者改裝并加入想研究的元素

  • 不同品系的動(dòng)物對(duì)高架十字迷宮會(huì)有不同的反應(yīng),設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)需特別注意

  • 經(jīng)過(guò)多次的驗(yàn)證,訓(xùn)練階段會(huì)讓動(dòng)物熟悉環(huán)境,大大降低實(shí)驗(yàn)階段探索的頻率,動(dòng)物很有可能在實(shí)驗(yàn)一開(kāi)始就躲在它熟悉的角落休息,因此在新的實(shí)驗(yàn)流程中,進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)是不需要訓(xùn)練的。



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