方法：

第1部分：朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響

• 朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響

條件性恐懼模型的復(fù)制：將實驗動物隨機分為空白對照組、模型對照組、給 藥組，每組10只。給藥組實驗動物給予朱砂an神丸混懸液（經(jīng)灌胃途徑給予，

• 81mg/g)，空白對照組、模型對照組均給予相同體積的雙蒸水，1次/曰，連續(xù) 7日。在末次給藥后，將模型對照組、給藥組實驗動物依次放入條件性恐懼刺激 箱內(nèi)，適應(yīng)120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號(2000Hz，75dB)。第125秒，在聲音信號的基礎(chǔ)上給予實驗動物持續(xù)5秒的不可逃避的足底電刺激 (0.75mA)。第130秒聲音信號與電刺激同時結(jié)束，130?190秒內(nèi)不做任何處理。 第190秒重復(fù)120?190秒過程，連續(xù)20次。空白對照組僅給予聲音信號不給予 電刺激，其他操作相同。結(jié)束后讓實驗動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng) 籠。

恐懼記憶習(xí)得測試：復(fù)制條件性恐懼模型的次日，將各組實驗動物依次再放 入刺激箱內(nèi)，適應(yīng)120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號（2000Hz， 75dB)。第130秒聲音信號結(jié)束，130?190秒內(nèi)不做任何處理，記錄聲音信號停 止后60秒內(nèi)實驗動物的值直反應(yīng)時間。第190秒重復(fù)12CM90秒過程，連續(xù)5 次。結(jié)束后讓實驗動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng)籠。記錄各組實驗動 物的僵直反應(yīng)時間，以此作為觀測指標探究朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記 憶習(xí)得的影響。

• 朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響

按上述“朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實驗方法進行

條件性恐懼模型的復(fù)制，在習(xí)得測試后的第1、3、5、7天，將各組實驗動物依 次再放入刺激箱內(nèi)，重復(fù)恐懼記憶習(xí)得測試的操作，記錄各組實驗動物的僵直反 應(yīng)時間，以此作為觀測指標探宂朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影 響。

• 朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響

按上述“朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實驗方法進行

條件性恐懼模型的復(fù)制，在各組實驗動物進行條件性恐懼模型復(fù)制的次日，將各 組實驗動物放入大小鼠開場活動實驗箱內(nèi)，記錄各組實驗動物運動時間、運動距 離，以此探究朱砂an神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響。

實驗儀器

條件性恐懼實驗監(jiān)測系統(tǒng)(上海欣軟信息科技有限公司，型號XR-XC404-2)， 條件性恐懼刺激箱包含隔音箱和刺激箱，隔音箱為670x650x700mm的斯金納箱, 可接入攝像頭、蜂鳴器、喇叭刺激器等模塊。實驗箱尺寸為300x300x400mm的 亞克力箱，前后壁透明，左右壁黑白相間，箱子底部為(p4mm不銹鋼棒，軸間距 為16mm的不銹鋼棒，可通0?5mA恒定電流；

條件性恐懼實驗分析系統(tǒng)（上海欣軟信息科技有限公司，型號：SuperFcs); 

實驗結(jié)果表明：模型對照組實驗動物PS幅值變化率顯著高于空白對照組， LTP出現(xiàn)異常的增強。這種突觸功能可塑性的改變可能與條件性恐懼刺激過程 中，海馬出現(xiàn)應(yīng)激損傷有關(guān)。而給藥組實驗動物的PS幅值變化率顯著低于模型 對照組，與空白對照組更為接近。說明朱砂an神丸能夠下調(diào)海馬異常增強的LTP 7]C平，從而恢復(fù)了海馬LTP/LTD的正常調(diào)節(jié)。

LTP和LTD的誘導(dǎo)都依賴于NMDA受體，而受體激活后產(chǎn)生的是LTP還 是LTD，與突觸后膜Ca?濃度升高的水平有關(guān)。Ca2+濃度迅速的大幅度增加將誘 導(dǎo)LTP而適當(dāng)程度的増加會誘導(dǎo)LTD。正常情況下NMDA與Glu結(jié)合后將突觸 前膜的電信號轉(zhuǎn)化成突觸后膜的Ca2+信號，使突觸后膜的Ca2+濃度升高，大量 的Ca2M乍為**信使，可進一步激活生化級聯(lián)反應(yīng)，從而改變突觸可塑性，產(chǎn)生 LTP。LTP產(chǎn)生后，突觸后膜的一些信使分子作用于突觸前膜，增強Glu的釋 放，維持LTP。但是，慢性應(yīng)激增加海馬內(nèi)Glu含量，Glu與NMDA受體結(jié)合， 激活NMDA受體門控的Ca2+通道，引起Ca2+過度內(nèi)流，增強了 LTP, LTD受 到抑制，結(jié)果導(dǎo)致新的記憶不能與已有記憶整合，這可能是恐懼記憶難以消退的 機制之一。

綜上所述，本實驗確定了朱砂an神丸具有促進恐懼記憶消退的作用，其作用 機理可能是與其保護海馬神經(jīng)元，增強海馬突觸結(jié)構(gòu)與功能可塑性相關(guān)。對于朱 砂an神丸是否能夠加強LTD，促進新記憶寫入己有記憶框架，需要通過測定給 藥后實驗動物LTD的情況進行實驗研究來驗證此假說。對于朱砂an神丸具體改 變海馬區(qū)哪些相關(guān)蛋白的表達也有待進一步研究證實。