腸易激綜合征( Irritable bowel syndrome，IBS) 是臨床上常見(jiàn)的一種功能性腸道疾，常以腹tong、腹瀉、bian等為主要臨床表現(xiàn)。我國(guó)發(fā)病率約為1% ～ 16%。腹瀉型腸易激綜合征 ( Diarrhea －predominant irritable bowel syndrome，IBS － D) 是 IBS*常見(jiàn)的亞型，占 IBS 23． 3% ～ 65． 0%，以反復(fù)腹瀉、腹tong發(fā)作為主要臨床表現(xiàn)，常伴焦慮、抑郁等精神心理異常。研究發(fā)現(xiàn)，IBS 發(fā)病多與胃腸道動(dòng)力異常以及內(nèi)臟感覺(jué)高敏感性有關(guān)。魏瑋教授臨床用溫腎健脾法zhi療 IBS － D 患者臨床療效甚佳，溫腎健脾法對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠 內(nèi)臟敏感性和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響通過(guò)觀察溫腎健脾法對(duì) IBS － D 大鼠內(nèi)臟敏感性及曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響，探索溫腎健脾法zhi療 IBS － D 的療效和作用機(jī)制，為溫腎健脾法在臨床的推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1． 1 實(shí)驗(yàn)材料

1． 1． 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 28 只 SD 大鼠乳鼠及 SD 大鼠母鼠購(gòu)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心。等級(jí): SPF 級(jí)，動(dòng)物批號(hào): 42000600023620，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK( 鄂) 2013 － 0069。

1． 1． 2 實(shí)驗(yàn)要?jiǎng)?wù) 番瀉葉，要?jiǎng)?wù)購(gòu)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院; 溫腎健脾方由肉豆蔻 15 g，補(bǔ)骨脂 30g，五味子 9 g，吳茱萸 9 g，黨參 30 g，白術(shù) 15 g，郁金18 g，生姜 10 g，大棗 10 g 組成 。要?jiǎng)?wù)購(gòu)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院。匹維溴銨，購(gòu)于北京萬(wàn)生藥業(yè)有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H20133036。

1． 1． 3 試劑與儀器 球囊導(dǎo)管: 廣州維力醫(yī)療器械股份有限公司( 8FＲ) ; 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱: 上海欣軟( XＲ －XZ301) ; YP402N 電子天平( 上海菁海儀器有限公司) ; AHB － 2 － LB 萬(wàn)能照相機(jī)( Olympus 公司) 。

1． 2 實(shí)驗(yàn)方法

1． 2． 1 分組與給藥 參照課題組前期造模方法造模 。28 只剛出生乳鼠隨機(jī)分為 4 組，每組 7 只，并與 1 只母鼠同籠飼養(yǎng)。模型組( Model 組) 、溫腎健脾方組( WSJP 組) 及匹維溴銨組( Pinaverium bromide 組) 乳鼠于出生后第 2 天 ～ 第 21 天每天上午9: 00 － 12: 00 與母鼠分離 3 h，正常組( Normal 組) 不予干預(yù)。第 22 天斷奶，予常規(guī)自由飲食。第 30 天起模型組、溫腎健脾方組及匹維溴銨組以 1． 0 g /ml番瀉葉水煎液灌胃( 10 ml / kg) ，1 次/ d。同時(shí)溫腎健脾 方 組 將 中 藥 定 量 加 水 400 ml，煎 煮 濃 縮 至200 ml，按 10 ml / kg 灌胃給藥，2 次/ d( 大鼠用藥劑量= 人體用藥劑量 × KB/KA，KB = 0． 71，KA = 0． 11) 。匹維 溴 銨 片 碾 碎 后 溶 于 蒸 餾 水 配 制 成 濃 度 為1． 5 mg /ml混懸液，按15 mg /( kg·d) 劑量灌胃給藥，2 次/ d( 即匹維溴銨組灌胃劑量為30 mg/( kg·d) 。溫腎健脾法對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠 內(nèi)臟敏感性和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響正常組、模型組以相同體積生理鹽水灌胃，連續(xù) 4 周。

1． 2． 2 觀察指標(biāo)

1． 2． 2． 1 一般情況 觀察大鼠的精神狀態(tài)、體質(zhì)量、活動(dòng)情況、毛發(fā)光澤度、食欲、大便性狀等。

1． 2． 2． 2 腹壁撤退反射 造模后大鼠在實(shí)驗(yàn)前24 h禁食不禁水，輕觸其門(mén)部位使其排盡大便。

在大鼠輕度麻醉狀態(tài)下從門(mén)緩慢插入未充氣且涂石蠟油的后帶球囊的導(dǎo)管，球囊末端距門(mén)約1 cm，在門(mén)外1 cm 處將其固定在大鼠尾根部。每只大鼠給予球囊擴(kuò)張 3 次，容量分別為 1． 0、1． 5、2． 0 ml，每次擴(kuò)張持續(xù) 30 s。每次 4 min，每只重復(fù) 3 次，每組 7 只大鼠 AWＲ 評(píng)分( 表 1) 取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

表 1 AWＲ 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

評(píng)分 大鼠腹壁撤退反射0 給予結(jié)直腸擴(kuò)張刺激時(shí)大鼠情緒基本穩(wěn)定1 給予刺激時(shí)變得不穩(wěn)定，偶爾扭動(dòng)頭部2 腹背部肌肉輕微收縮但腹部未抬離地面

3 腹背部肌肉較強(qiáng)烈收縮并把腹部抬離地面4 腹部肌肉強(qiáng)烈收縮，腹部呈弓形并把腹部、會(huì)**抬離地面

1． 2． 2． 3 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)( 上海欣軟 XＲ －XZ301) 所用實(shí)驗(yàn)箱為高 30 ～ 40 cm，底邊長(zhǎng)為 100cm 的曠場(chǎng)，周壁的顏色為黑色，曠場(chǎng)底面被平均分為 25 個(gè) 4 cm × 4 cm 的小方格。正上方架攝像頭，視野覆蓋整個(gè)曠場(chǎng)。將大鼠放置在正中央格，同時(shí)進(jìn)行攝像和計(jì)時(shí)，時(shí)間為 5 min。通過(guò)計(jì)算機(jī)示蹤分析系統(tǒng)來(lái)分析大鼠在一定時(shí)間內(nèi)的活動(dòng)狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)室要保持安靜，室溫為 20 ℃ 左右，光線充足。觀察指標(biāo): 方格間穿行次數(shù)( 動(dòng)物的四肢從一個(gè)格進(jìn)入另一個(gè)格為穿行一次) 、直立次數(shù)( 動(dòng)物雙前肢同時(shí)離地，或者雙前肢放在墻壁尚算作直立一次) 、中央格停留時(shí)間、穿越中央格的次數(shù)。溫腎健脾法對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠 內(nèi)臟敏感性和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響

  型號(hào)：XR-XZ301，配套軟件為SuperMaze動(dòng)物行為分析軟件

1． 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS16． 0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)以均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差( x ± s) 表示，不同組間兩兩比較采用單因素方差分析( One － way ANOVA) 中 LSD 法( *小顯著性法) ，P ＜ 0． 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2． 1 各組大鼠一般狀態(tài)觀察

正常組: 大鼠精神狀態(tài)良好，活動(dòng)性積極，糞便呈顆粒狀。毛發(fā)色白、光澤度良好。進(jìn)食及飲水量正常。模型組: 大鼠精神狀態(tài)萎靡，活動(dòng)積極性明顯減弱，出現(xiàn)困乏狀態(tài)。糞便稀薄不成形。毛發(fā)色澤略微發(fā)黃，缺少光澤度。飲水量增加而進(jìn)食量減少。溫腎健脾方組: 大鼠精神狀態(tài)有一定程度的恢復(fù)，活動(dòng)積極性提高。糞便在zhi療 1 周結(jié)束后由稀薄不成形轉(zhuǎn)為半干型及顆粒狀。毛發(fā)光澤度和進(jìn)食量有所提高。匹維溴銨組: 大鼠精神狀態(tài)有一定程度的恢復(fù)，困乏現(xiàn)象基本消失，活動(dòng)積極性提高。糞便在zhi療 5 天后逐漸轉(zhuǎn)為半干型及顆粒狀。毛發(fā)光澤度和進(jìn)食量有所提高。

2． 2 大鼠體質(zhì)量變化監(jiān)測(cè)

隨著時(shí)間延長(zhǎng)，各組大鼠體質(zhì)量都有一定程度的增加。在同一時(shí)間點(diǎn)，模型組相較于正常組的體質(zhì)量顯著降低; 匹維溴銨組和溫腎健脾方組與模型組比較，大鼠體質(zhì)量顯著增加; 匹維溴銨組與溫腎健脾方組體質(zhì)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖 1 各組大鼠體質(zhì)量變化

2． 2 腹壁撤退反射( AWＲ 評(píng)分)

在擴(kuò)張?bào)w積為 1． 0 ml 時(shí)，與正常組比較，模型組 AWＲ 評(píng)分顯著升高( P ＜ 0． 01) ; 與模型組比較，匹維溴銨組 AWＲ 評(píng)分顯著降低( P ＜ 0． 01) ; 與模型組比較，溫腎健脾方組 AWＲ 評(píng)分有所降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在擴(kuò)張?bào)w積為 1． 5 ml 和 2． 0 ml 時(shí)，與正常組比較，模型組 AWＲ 評(píng)分顯著升高( P ＜0． 01) ，與模型組比較，匹維溴銨組和溫腎健脾方組AWＲ 評(píng)分顯著降低( P ＜ 0． 01) 。

2． 3 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

與正常組比較，模型組大鼠直立次數(shù)、方格間穿行次數(shù)、穿越中央格次數(shù)、中央格停留時(shí)間均顯著降低( P ＜ 0． 01) 。與模型組相比，溫腎健脾方組與匹維溴銨組直立次數(shù)、方格間穿行次數(shù)、穿越中央格次數(shù)、中央格停留時(shí)間顯著升高( P ＜ 0． 01) 。匹維溴銨組與溫腎健脾方組直立次數(shù)、方格間穿行次數(shù)、穿越中央格次數(shù)、中央格停留時(shí)間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

IBS － D 的病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，大量的研究表明早期不佳生活事件和精神**與IBS 的發(fā)病關(guān)系密切。本研究造模方法以團(tuán)隊(duì)前期研究的造模方法為基礎(chǔ)，予番瀉葉灌胃聯(lián)合母嬰分離，即采用物理化學(xué)刺激共同作用的方法制備內(nèi)臟高敏并脾腎陽(yáng)虛型 IBS － D 大鼠模型－。魏瑋教授的溫腎健脾方是在四神丸基礎(chǔ)上加入黨參、白術(shù)、郁金組成，功效為溫補(bǔ)脾腎、澀腸止瀉。前期研究顯示，該方可有效改善 IBS － D 大鼠腹瀉、倦怠蜷臥、飲食減少、體重下降等一般狀況，提示其可用于脾腎陽(yáng)虛型 IBS － D 大鼠模型的要?jiǎng)?wù)反證。目前評(píng)價(jià)內(nèi)臟高敏模型是否成功的方法主要有腹外斜肌放電和腹壁撤退反射評(píng)分。因腹外斜肌放電實(shí)驗(yàn)屬于有創(chuàng)性操作，增加實(shí)驗(yàn)復(fù)雜度，因此腹壁撤退反射評(píng)分在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用更為廣泛。腹壁撤退反射評(píng)分，是通過(guò)觀察受刺激后大鼠的腹肌收縮強(qiáng)度給出評(píng)分。本研究采用腹壁撤退反射評(píng)分，結(jié)果顯示模型組較正常組 AWＲ 評(píng)分顯著升高，說(shuō)明模型組大鼠存在內(nèi)臟高敏感。而溫腎健脾方和匹維溴銨zhi療可以顯著降低 AWＲ 評(píng)分，能夠緩解 IBS － D 大鼠的內(nèi)臟敏感性。

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)( OFT) 又稱敞箱實(shí)驗(yàn)，是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。在大鼠進(jìn)入新環(huán)境后，會(huì)經(jīng)歷緊張、興奮、探索、適應(yīng)等心理過(guò)程，其活動(dòng)表現(xiàn)為趨避性，好奇性及探索性的特點(diǎn)，因而 OFT 能夠反映大鼠進(jìn)入空曠區(qū)域時(shí)的自我情緒，是評(píng)價(jià)嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)功能和焦慮狀態(tài)的經(jīng)典方法。本研究顯示，模型組大鼠與正常組相比，直立次數(shù)、方格間穿行次數(shù)、穿越中央格次數(shù)、中央格停留時(shí)間均顯著降低，說(shuō)明模型大鼠對(duì)新鮮事物的好奇程度降低，精神萎靡，活躍性降低，符合焦慮抑郁樣行為。與模型組相比，溫腎健脾方組與匹維溴銨組直立次數(shù)、方格間穿行次數(shù)、穿越中央格次數(shù)、中央格停留時(shí)間顯著升高。匹維溴銨組與溫腎健脾方組直立次數(shù)、方格間穿行次數(shù)、穿越中央格次數(shù)、中央格停留時(shí)間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明溫腎健脾方和匹維溴銨具有一定的抗焦慮的作用。