【目的】比較不同劑量龍眼果肉醇提物和水提物對(duì)東莨菪堿所致記憶獲得性障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，初步解釋龍眼果肉改善學(xué)習(xí)記憶的作用機(jī)制。

【方法】分析龍眼果肉醇提物和水提物中主要活性物質(zhì)含量。將無(wú)特定病原體（SPF 級(jí)）雄性昆明小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、龍眼果肉醇提物低劑量組/高劑量組（150 mg·kg-1/300mg·kg-1）、龍眼果肉水提物低劑量組/高劑量組（150 mg·kg-1/300 mg·kg-1），共 6 組，連續(xù)灌胃 28 d 后，空白組腹腔注射等量生理鹽水，各試驗(yàn)組腹腔注射東莨菪堿造模，0.5 h 后，以潛伏期和穿梭次數(shù)為考察指標(biāo)，采用避暗試驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，作為習(xí)得成績(jī)；24 h 后再次進(jìn)行避暗試驗(yàn)，對(duì)小鼠進(jìn)行記憶保持測(cè)試，測(cè)試結(jié)束后摘眼球取血，脫頸致死，取腦組織進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)。測(cè)定腦組織的膽堿類(lèi)（乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶 choline acetyltransferase，ChAT 和乙酰膽堿酯酶 acetylcholinesterase，AChE 活力）及抗氧化相關(guān)指標(biāo)（超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量），血清中抗氧化相關(guān)指標(biāo)（SOD、GSH-Px 活力及 MDA 含量）。通過(guò)綜合比較各組間行為學(xué)試驗(yàn)指標(biāo)、腦組織、血清生化指標(biāo)，判斷龍眼果肉改善學(xué)習(xí)記憶功能的作用效果及作用機(jī)制。

【結(jié)果】分析龍眼果肉提取物成分發(fā)現(xiàn)，龍眼果肉水提物主要為多糖及蛋白質(zhì)，醇提物除含有糖類(lèi)外，還含有較豐富的酚類(lèi)、黃酮類(lèi)和磷脂物質(zhì)，其中，醇提物中總酚、總黃酮、總磷脂含量顯著高于水提物的（P＜0.05）。行為學(xué)試驗(yàn)表明，模型組小鼠在避暗試驗(yàn)中 5 min 內(nèi)穿梭次數(shù)為 2.89 次，是正常小鼠的 6.09 倍，高劑量龍眼果肉醇提物和水提物組小鼠穿梭次數(shù)分別為 0.75 次和 0.56 次，與正常組無(wú)顯著差異；癡呆小鼠在避暗試驗(yàn)中的潛伏期僅為正常組的 0.43 倍,與模型組相比，各劑量龍眼果肉醇提物和水提物均能顯著增加癡呆小鼠在避暗試驗(yàn)中的潛伏期（P＜0.05），且存在一定劑量效應(yīng)關(guān)系，其中龍眼果肉醇提物和水提物高劑量組小鼠的避暗潛伏期分別為 289.18 s、290.80 s，與正常組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）。生化指標(biāo)方面，與模型組相比，各劑量龍眼果肉醇提物和水提物均能顯著增加癡呆小鼠腦組織中 ChAT 活力，顯著降低 AChE 活力（P＜0.05），且存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。相同劑量時(shí)，龍眼果肉水提物效果優(yōu)于醇提物，其中龍眼果肉醇提物高劑量組，龍眼果肉水提物低、高劑量組小鼠腦組織中 ChAT 活力基本恢復(fù)正常水平；在抗氧化水平方面，與模型組相比，龍眼果肉醇提物高劑量組顯著增加癡呆小鼠腦組織和血清中SOD、GSH-Px 活力，顯著降低 MDA 含量（P＜0.05），基本達(dá)到正常水平，效果優(yōu)于同等劑量的龍眼果肉水提物。

【結(jié)論】龍眼果肉水提物和醇提物均可改善東莨菪堿誘導(dǎo)記憶獲得性障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，但二者的作用機(jī)制可能存在差異，龍眼果肉水提物主要通過(guò)調(diào)節(jié)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)改善學(xué)習(xí)記憶功能，其主要作用的物質(zhì)基礎(chǔ)可能為多糖或糖蛋白；醇提物則主要通過(guò)提高機(jī)體抗氧化活力改善學(xué)習(xí)記憶功能，其主要作用物質(zhì)可能為多酚、黃酮、磷脂等。

關(guān)鍵詞：龍眼果肉；東莨菪堿；學(xué)習(xí)記憶功能；乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶; 抗氧化

1.1 材料與供試動(dòng)物

1.1.1 材料、藥品與試劑 龍眼果干（含水量為12.40%），由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所提供，品種為‘儲(chǔ)良’；氫溴酸東莨菪堿注射液（scopolaminehydrobromide injection）購(gòu)于徐州萊恩藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（choline acetyltransferase，ChAT）、乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase，AChE）和總蛋白質(zhì)（totalprotein，TP）試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。沒(méi)食子酸、原兒茶酸、綠原酸、兒茶素、表兒茶素、香草酸、蘆丁、鞣花酸、阿魏酸、異阿魏酸、水楊酸、香豆酸及鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自美國(guó) Sigma 公司，甲酸、乙酸、乙腈為色譜純?cè)噭?，?gòu)于美國(guó) Fisher 公司。95%乙醇（分析純）購(gòu)于天津市大茂化學(xué)試劑廠，其余試劑均為分析純。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性 KM 小鼠，體重 20—25 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（粵）2011-0015。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫（23±2）℃，相對(duì)濕度 50%—60%，12/12 h 明暗交替，自由飲食、攝水。小鼠于試驗(yàn)前 7 d 置于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)環(huán)境。

1.2 主要儀器

XR-XB110避暗系統(tǒng)（上海欣軟信息科技有限公司），SB-5200TD 超聲儀（寧波新芝生物科技股份有限公司），F(xiàn)DU-2110 真空冷凍干燥機(jī)（東京理化器械株式會(huì)社），EYELA CA-2600 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會(huì)社），UV1800 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津有限公司），多功能熒光分析儀 FluoroskanAscent FL（美國(guó) Thermo Fisher Scientific 公司），HZQQX 型全溫振蕩器（哈爾濱東聯(lián)電子開(kāi)發(fā)有限公司），冷凍離心機(jī)（美國(guó) Thermo Electron 公司），DS-1高速組織搗碎機(jī)（上海標(biāo)本模型廠）、AgilentTechnologies 1260 Series、6890N-5975B GC-MS （美國(guó) Agilent 公司）。

1.3 龍眼果肉提取物的制備

1.3.1 龍眼果肉醇提物的制備 取一定量的龍眼干果肉，按 1﹕4（m/v）加入 95%乙醇打漿，室溫浸泡1 h，超聲提取 30 min，如此反復(fù) 2 次，離心（4 000r/min，10 min）收集上清液，濾渣重復(fù)提取 1 次，合并上清液。55℃減壓濃縮至無(wú)乙醇蒸出，此濃縮浸膏即為龍眼果肉醇提物（含水量為 10.86%）。

1.3.2 龍眼果肉水提物的制備 在 1.3.1 離心后的沉淀物中以 1﹕20（m/v）加入蒸餾水，按 1.3.1 的方法提取，收集上清液。將濾渣用 1﹕5 的蒸餾水復(fù)提一次，合并上清液，減壓濃縮后加 95%乙醇沉降（終濃度為80%），4℃冷藏過(guò)夜，離心收集沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌 3 次，冷凍干燥得龍眼果肉水提物。

1.5 動(dòng)物分組及處理

將72 只小鼠隨機(jī)分成 6 組，每組 12 只，分別為：空白組、模型組、龍眼果肉醇提物低劑量組（150mg·kg-1）、龍眼果肉醇提物高劑量組（300 mg·kg-1）、龍眼果肉水提物低劑量組（150 mg·kg-1）、龍眼果肉水提物高劑量組（300 mg·kg-1）。各劑量以提取物干基計(jì)，參照龍眼干果肉每日攝取量（9—15 g）基于人-動(dòng)物劑量轉(zhuǎn)換公式得到，并參考文獻(xiàn)做一

定調(diào)整。各組均按10 mL·kg-1·b.w.-1灌胃給藥（空白組和模型組灌胃生理鹽水），每天一次，連續(xù) 28 d。在*后一次給藥 1 h 后，除空白組腹腔注射生理鹽水外，其他組均腹腔注射東莨菪堿（3 mg·kg-1·b.w.-1）制備小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型，并于注射 20 min 后進(jìn)

行避暗試驗(yàn)。

1.6 避暗試驗(yàn)

方法參考DONG 等進(jìn)行并做一些改進(jìn)，該試驗(yàn)分為習(xí)得測(cè)試（Acquisition trial）和記憶保持測(cè)試（Retention trial）兩部分。小鼠灌胃第 26 天起，連續(xù) 2 d 在同一時(shí)間將小鼠放入避暗儀中適應(yīng) 5 min。第 28 天腹腔注射東莨菪堿20 min 后開(kāi)始習(xí)得測(cè)試，將小鼠背對(duì)拱門(mén)放入明箱后，給暗室不銹鋼柵欄通以 0.3 mA 電流持續(xù) 5 min，由于小鼠具有趨暗的習(xí)性會(huì)由明室向暗室探索，小鼠一進(jìn)入暗室即受電擊，其正確反應(yīng)是回到明室，記錄小鼠第 1 次進(jìn)入暗室的時(shí)間即為避暗潛伏期（step-throughlatency），步入潛伏期大于 5 min 者棄去不用,5 min 內(nèi)小鼠進(jìn)入暗室的次數(shù)即為穿梭次數(shù)（shuttle number）,作為習(xí)得成績(jī)；24 h 后對(duì)小鼠進(jìn)行記憶保持測(cè)試，記錄小鼠 5 min 內(nèi)的潛伏期及進(jìn)入暗室的次數(shù)（即穿梭次數(shù)），作為記憶成績(jī)，5 min 內(nèi)未進(jìn)入暗室的小鼠其潛伏期按 300 s 計(jì)，穿梭次數(shù)計(jì) 0 次。

1.7 小鼠血漿、腦組織內(nèi)生化指標(biāo)檢測(cè)行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)束后，乙醚麻醉小鼠，摘眼球取血，全血離心后取血清；脫頸椎處死小鼠，迅速于冰上斷頭取腦，加 9 倍體積（m/V）的冰生理鹽水進(jìn)行勻漿，4℃離心（3 000 r/min，10 min），取上清液，即為 10%組織勻漿。分別按照試劑盒表明書(shū)測(cè)定腦組織勻漿中ChAT 和 AChE 活力，腦組織勻漿和血清中 SOD、GSH-Px 活力及 MDA 含量，采用考馬斯亮蘭法測(cè)定組織蛋白含量。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用SPSS19.0 軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較采用單因子方差分析（one way ANOVA），顯著性用 LSD 法及 Dunnett’s 檢驗(yàn)（P＜0.05），所有數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x ±sd）表示。