電針抗抑郁研究的模型探討

【 摘 要】 目的：探討電針抗抑郁研究適宜模型的選擇。 方法： 選用**實(shí)驗(yàn)方法， 觀察去甲腎上腺素毒性實(shí)驗(yàn)小鼠的死亡率、5-羥色胺酸甩頭實(shí)驗(yàn)小鼠甩頭次數(shù)。 用改變環(huán)境條件的方法， 觀察懸尾實(shí)驗(yàn)小鼠懸尾的不動時(shí)間和通過慢性應(yīng)激模型觀察開野實(shí)驗(yàn)大鼠的活動性及檢測糖水實(shí)驗(yàn)糖水的攝入量。 結(jié)果： 與空白對照組相比，電針不能降低去甲腎上腺素毒性實(shí)驗(yàn)小鼠的死亡率，不能減少 5-羥色胺酸甩頭實(shí)驗(yàn)小鼠的甩頭次數(shù)；但能減少懸尾實(shí)驗(yàn)小鼠懸尾的不動時(shí)間；慢性應(yīng)激模型中，與模型組及模型束縛組相比，電針組和百優(yōu)解組可明顯增加開野實(shí)驗(yàn)的垂直運(yùn)動次數(shù)及糖水的攝入量。 結(jié)論： 針刺對抑郁癥的實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)選擇改變環(huán)境條件誘發(fā)的抑郁動物模型進(jìn)行，**誘發(fā)的抑郁模型可能是不適宜的。
【 關(guān)鍵詞】 抑郁 慢性應(yīng)激 電針 動物模型

抑郁癥是由多種原因引起的、以抑郁為主要癥狀的一組心境障礙或情感障礙， 近年來發(fā)病率不斷上升，嚴(yán)重影響著人們的身心健康， 同時(shí)， 抑郁患者還伴有嚴(yán)重的**傾向。 該病已在我國**經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)排名中占到**位，為 6.2%。

抑郁癥目前的**方法主要是****， 過去以單胺氧化酶抑制劑和三環(huán)類抗抑郁劑為主， 近年來發(fā)展了以百優(yōu)解 （ 鹽酸氟西?。榇淼?5-羥色胺能抗抑郁劑。 由于抑郁癥是多系統(tǒng)病變， ****多針對單靶點(diǎn)進(jìn)行，長期應(yīng)用療效降低，且有嚴(yán)重的毒副作用和過量的危險(xiǎn)性。 而針刺**抑郁癥在臨床實(shí)踐中已取得了一定的療效， 具有整體調(diào)節(jié)的優(yōu)勢，且無毒、副作用。
目前進(jìn)行抑郁研究的動物模型主要有兩大類，**誘發(fā)的抑郁動物模型和改變環(huán)境條件誘發(fā)的抑郁動物模型。 許多學(xué)者從**研究的角度對這兩大類模型進(jìn)行了評價(jià)。 但針刺的作用機(jī)理不同于**，所以要開展針刺抑郁的研究首先要選擇符合針
刺作用原理的抑郁模型。 我們選擇了**誘發(fā)模型中的去甲腎上腺素毒性實(shí)驗(yàn)和 5-羥色胺酸甩頭實(shí)驗(yàn)及改變環(huán)境條件誘發(fā)的抑郁動物模型中的小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和慢性應(yīng)激模型進(jìn)行了探討。
1 材料與方法
1.1 材料
去甲腎上腺素 （ Norepinephrine， NE）由上海禾豐制藥有限公司提供，5-羥色胺酸 （ 5-hydroxytryptophan，5-HTP）由美國 Mp 公司提供， 鹽酸帕吉林 （ hydrochloric pargylin）由美國 Sigma 公司提供，陽性對照藥百優(yōu)解由英國禮來公司提供。 韓氏 （ H ·A ·N ·S）LH202 型電針儀由北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司提供。 雄性昆明種小鼠及 SD 大鼠由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，清潔級。
1.2 電針方法
按動物選**譜選取相當(dāng)于人體解剖部位的印堂穴和百會穴， 它們?yōu)獒槾?*抑郁癥的常用穴。平刺進(jìn)針， 接電針儀， 大鼠、小鼠電針頻率均為2 Hz，小鼠進(jìn)針深度為 0. 2 ～ 0.5 cm， 電流強(qiáng)度為0.2 ～0.3 mA，大鼠進(jìn)針深度為 0. 5 ～ 1 cm， 電流強(qiáng)度為 0.6 mA，以頭部微顫為宜。 由于 “ 百會” “ 印堂”穴相距較近，在電針操作中需要注意避免短路。
1.3 去甲腎上腺素 （ NE）毒性實(shí)驗(yàn)
將雄性昆明小鼠 （ 18 ～ 22 g）按體重隨機(jī)分為 3組，空白組、百優(yōu)解組、電針組， 每組 10 只。 百優(yōu)解組給藥量為 2.6 mg / kg，按 0. 2 mL / 10 g 灌胃， 每日 1次， 連 續(xù) 給 藥 1 周。 電 針 組 每 日 電 針 1 次， 每 次20 min，連續(xù) 1 周。 各組于第 7 d 電針及給藥 1 h 后皮下注射 NE （ 12 mg / kg） ［ 2］，**濃度為 1.2 mg / mL，
然后將小鼠置于塑料籠中， 自由飲水、 進(jìn)食。 48 h后，觀察各組小鼠的死亡數(shù)。
1.4 5-羥色胺酸 （ 5-HTP）甩頭實(shí)驗(yàn)
動物及分組、 百優(yōu)解給藥及電針方法同 1. 3。第 7 d 腹腔注射鹽酸帕吉林 100 mg / kg，30 min 后針刺組電針 20 min，1 h 后百優(yōu)解組灌胃給藥， 再過 30min，尾靜脈注射 5-HTP 10 mg / kg ［ 3］， 并立即放入 24cm × 15 cm × 15 cm 的小鼠箱內(nèi)， 累計(jì)每 5 min 內(nèi)小鼠的甩頭次數(shù)，共測定 25 min。
1.5 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)
動物及分組、 百優(yōu)解給藥及電針方法同 1. 3。第 7 d 針刺和給藥 1 h 后， 采用由上海欣軟信息科技有限公司提供的懸尾實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)裝置測試 記錄各組小鼠的懸尾不動時(shí)間。
1.6 慢性應(yīng)激模型

造模方法：根據(jù)文獻(xiàn)方法改進(jìn) ［ 5］， 取 SD 大鼠 50只，體重為 160 ～ 180 g，通過開野實(shí)驗(yàn)將水平運(yùn)動次數(shù)加垂直運(yùn)動次數(shù)不足 30 次或超過 120 次的大鼠剔除，然后按體重隨機(jī)分組， 分為空白對照組、模型組、百優(yōu)解組、模型束縛組 （ 由于選擇慢性應(yīng)激模型，電針同時(shí)會對大鼠產(chǎn)生束縛的應(yīng)激刺激， 為了避免因此而造成的誤差，我們加設(shè)了模型束縛組，造模同時(shí)給予大鼠與針刺相同方式及刺激時(shí)間的束縛）、電
針組，每組 10 只。 造模動物全部孤養(yǎng)， 接受 7 種不同的應(yīng)激刺激 21 d，包括冷水游泳 （ 10 ℃，5 min）、夾尾 （ 3 min）、禁水 （ 24 h）、禁食 （ 24 h）、電擊 （ 電壓為 30V，電 擊 5 s， 間 歇 5 s 共 進(jìn) 行 2 min）、 晝 夜 顛 倒（ 24 h）、溫箱 （ 40 ℃，5 min）， 平均每種刺激 3 次。 正常組大鼠每籠 5 只飼養(yǎng)， 不予任何刺激。 造模同時(shí)給藥及給予針刺** （ 方法同上）。 于第 22 d 進(jìn)行
開野實(shí)驗(yàn)及糖水實(shí)驗(yàn)測定。
開野實(shí)驗(yàn)方法：按照參考文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)所用敞箱為立方形，高 40 cm，長、寬均為100 cm， 周壁、底面為灰色，該儀器由上海欣軟信息科技有限公司提供，底板在電腦上由Supermaze動物行為學(xué)分析軟件分成25宮格，將大鼠置于敞箱底面的中心方格內(nèi)，開始進(jìn)行測試，每只動物測定 1 次， 每次測定時(shí)間為 180 s，記錄水平運(yùn)動次數(shù)及垂直運(yùn)動次數(shù)。
糖水試驗(yàn)方法：將大鼠禁水 24 h 后，給予 1%的蔗糖水，加瓶重 250 g，24 h 后稱量蔗糖水瓶的重量，計(jì)算大鼠在 24 h 內(nèi)蔗糖水消耗量。
1.7 統(tǒng)計(jì)方法
數(shù)據(jù)以- x ± s 表示，用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件 SPSS 11. 0 進(jìn)行單因素方差分析，以 P < 0. 05 作為差異顯著性水平。 NE 毒性實(shí)驗(yàn)以百分率表示，進(jìn)行x2檢驗(yàn)。
2 結(jié) 果
2.1 電針對 NE 毒性實(shí)驗(yàn)小鼠死亡率的影響

表 1 結(jié)果表明， 給予亞致死量的 NE， 電針組與空白組的小鼠死亡率無顯著性差異， 而百優(yōu)解組小鼠死亡率明顯高于空白組。
2.2 電針對 5-HTP 誘發(fā)的小鼠甩頭實(shí)驗(yàn)的影響
給予 5-HTP 后小鼠迅速出現(xiàn)了 “ 甩頭”動作， 在10 ～ 25 min 之間甩頭的頻率達(dá)到了高峰。 由表 2 可見，電針組小鼠的甩頭次數(shù)與空白組無明顯差異，而百優(yōu)解組可以顯著增加 5-HTP 誘發(fā)的小鼠甩頭動作。

2.3 電針對小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動時(shí)間的影響

由表 3 可見， 在小鼠懸尾記錄的 5 min 里， 電針組的不動時(shí)間明顯少于空白組， 百優(yōu)解組也可縮短小鼠懸尾的不動時(shí)間，同時(shí)，電針組與百優(yōu)解組比較亦有顯著性差異。
2.4 電針對慢性應(yīng)激模型大鼠開野實(shí)驗(yàn)的影響

由表 4 可見， 慢性應(yīng)激及在慢性應(yīng)激基礎(chǔ)上加束縛刺激均對大鼠的行為產(chǎn)生了影響， 模型組和模型束縛組開野實(shí)驗(yàn)的水平運(yùn)動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)都明顯少于空白組； 給予陽性對照藥百優(yōu)解的大鼠在垂直運(yùn)動次數(shù)上與模型組存在顯著性差異； 電針組對應(yīng)激模型抑郁行為的影響在水平運(yùn)動次數(shù)和垂直運(yùn)動次數(shù)上都有表現(xiàn)， 即與模型束縛組在水平運(yùn)動上存在顯著差異， 垂直運(yùn)動次數(shù)顯著多于模型組和模型束縛組。
2.5 電針對慢性應(yīng)激模型大鼠糖水?dāng)z入量的影響

由表 5 可見， 模型組及模型束縛組的糖水?dāng)z入量顯著低于空白組；電針組與模型束縛組比較，糖水?dāng)z入量明顯增多； 百優(yōu)解組與模型組大鼠相比亦有顯著性差異。
3 討 論
**誘發(fā)的抑郁動物模型出現(xiàn)較早， 是根據(jù)抑郁癥的單胺假說設(shè)計(jì)的， 多用于評篩具有某專一神經(jīng)化學(xué)作用的抗抑郁藥的藥理作用。

抑郁癥的發(fā)病機(jī)制之一被認(rèn)為是由于機(jī)體內(nèi)單胺遞質(zhì)含量減少所致。 具有抗抑郁作用的**可能通過使體內(nèi)單胺遞質(zhì)含量增多， 從而產(chǎn)生抗抑郁作用。 設(shè)計(jì) NE 毒性實(shí)驗(yàn)， 給小鼠腹腔注射亞致死量的 NE，再給予受試藥。 如果受試藥可以增加小鼠體內(nèi)的 NE 含量，則達(dá)到致死量或超過致死量的 NE 可引起小鼠的死亡。 5-HTP 甩頭實(shí)驗(yàn)與 NE 毒性試驗(yàn)的原理相類似， 不同的是試驗(yàn)給予鹽酸帕吉林、5-HTP 引起小鼠甩頭動作， 若再給予受試藥使體內(nèi)的5-HT 含量增多時(shí)，小鼠在特定時(shí)間段內(nèi)的甩頭次數(shù)也可增多。
近年來研究發(fā)現(xiàn)， 應(yīng)激性生活事件是抑郁癥的明顯促發(fā)因素，并且認(rèn)為，慢性、低強(qiáng)度、長期的日常壓力是引發(fā)抑郁的主要原因。 為此設(shè)計(jì)了通過改變周圍環(huán)境誘發(fā)動物行為異常的抑郁動物模型。 這類動物模型力圖模擬抑郁病人環(huán)境誘因， 以異常行為作為觀測指標(biāo)， 進(jìn)行抑郁病因?qū)W的研究。 設(shè)計(jì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)，給予受試藥后，通過觀察小鼠懸尾后不再掙扎的不動時(shí)間， 來判斷小鼠對環(huán)境變化引起的絕望心理的持續(xù)時(shí)間，從而觀察受試藥的抗抑郁療效。模擬人的慢性應(yīng)激刺激設(shè)計(jì)慢性應(yīng)激模型， 通過給予大鼠長期的慢性應(yīng)激刺激， 導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生抑郁狀態(tài)，在造模同時(shí)加入干預(yù)手段，通過造模后的行為學(xué)觀察，判斷干預(yù)手段的抗抑郁作用。
針刺的作用機(jī)理不同于**， 針刺對機(jī)體具有雙向調(diào)節(jié)作用，通過對機(jī)體的良性調(diào)節(jié)作用，使機(jī)體處于動態(tài)平衡狀態(tài)。 在 NE 毒性實(shí)驗(yàn)和 5-HTP 甩頭實(shí)驗(yàn)中，針刺的作用應(yīng)體現(xiàn)為使體內(nèi)升高的物質(zhì)含量降低。 但本 NE 毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示， 電針不能改
善亞致死量的 NE 引起的小鼠毒性作用。 我們認(rèn)為，NE 毒性實(shí)驗(yàn)的造模方法， 使體內(nèi)的 NE 含量迅速升高，而電針不可能迅速阻斷 NE 在體內(nèi)的擴(kuò)散，從而不能降低小鼠的死亡率。 同樣， 在 5-HTP 甩頭實(shí)驗(yàn)中，迅速地給予 5-HTP 和鹽酸帕吉林，使小鼠體內(nèi)兩種物質(zhì)迅速升高， 電針不能在短時(shí)間內(nèi)完全阻斷這兩種物質(zhì)的作用，從行為學(xué)上看，不能迅速減緩5-HTP 和鹽酸帕吉林引起的甩頭行為。 可見這種**誘發(fā)的急性實(shí)驗(yàn)不符合針刺的作用機(jī)理。 而**誘發(fā)的抑郁動物模型為急性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停? 故推論不適于針刺抗抑郁的研究。 因針刺雖具有雙向調(diào)節(jié)作用，但存在作用強(qiáng)度和時(shí)效積累的問題。

在改變環(huán)境誘發(fā)的抑郁模型中， 針刺能改善動物對**刺激的反應(yīng)。 電針通過調(diào)整機(jī)能平衡， 從而抑制懸尾引起的小鼠絕望行為， 縮短小鼠懸尾的不動時(shí)間；電針又可以增強(qiáng)慢性應(yīng)激后大鼠的活動度，增強(qiáng)其探究行為，同時(shí)能改善由于慢性應(yīng)激刺激

導(dǎo)致的抑郁狀態(tài) 。

綜上結(jié)果分析可見， 針刺對抑郁癥的實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)選擇改變環(huán)境條件誘發(fā)的抑郁動物模型進(jìn)行， **誘發(fā)的抑郁模型可能是不適于針刺研究的。