Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)主要測(cè)定空間學(xué)習(xí)記憶能力，主要的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容有隱蔽站臺(tái)試驗(yàn)、空間探索試驗(yàn)、反向試驗(yàn)和可視站臺(tái)試驗(yàn)等。在這里主要介紹下文獻(xiàn)里面主要做的隱蔽站臺(tái)試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)的流程準(zhǔn)則。Morris水迷宮對(duì)卵巢切除大鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響

嚙齒類動(dòng)物**次游泳時(shí),一般不會(huì)找到藏于水面下的不可見的站臺(tái)。若動(dòng)物在入水游泳60～90s以內(nèi)仍未能找到水池中的站臺(tái)或未能爬上站臺(tái)時(shí),實(shí)驗(yàn)人員可將動(dòng)物引導(dǎo)置于站臺(tái)上站立10～30s,使動(dòng)物體會(huì)站在站臺(tái)上的感覺,這樣從**次開始,學(xué)習(xí)成績(jī)就能迅速提高。動(dòng)物爬上站臺(tái)后,讓動(dòng)物在站臺(tái)上站立5～10s。將大鼠從站臺(tái)上拿下來(lái),休息30～60s以后再進(jìn)行下一次訓(xùn)練。在一般情況下,正常大鼠在經(jīng)過(guò)4～6個(gè)實(shí)驗(yàn)日訓(xùn)練后,很快就學(xué)會(huì)以*快*佳的軌跡搜索到站臺(tái)的確切位置。

每天開始時(shí)，將鼠任意從四個(gè)象限（東北、西北、東南、西南）之一面向池壁放入水中，站臺(tái)放置于東南象限， 每次實(shí)驗(yàn)鼠共游泳60～90s來(lái)尋找隱藏的站臺(tái)。如果成功地找到站臺(tái)，鼠可以得到在站臺(tái)上的10～30s休息時(shí)間；如果60～90s內(nèi)未能成功的找到站臺(tái)，就由實(shí)驗(yàn)人員將鼠人工置于站臺(tái)上，且同樣給予10～30s的休息時(shí)間。有時(shí)鼠可能會(huì)在10～30s間隔時(shí)間到達(dá)之前從站臺(tái)上掉下或跳入水中繼續(xù)游泳。一旦這種情況發(fā)生，則將鼠重新放回站臺(tái)，并重新計(jì)時(shí)，使時(shí)間間隔到達(dá)（10～30s）。這樣可以確保每只鼠在每次實(shí)驗(yàn)后有相等的時(shí)間來(lái)觀察和獲取空間信息。

1 　材料和方法

1. 1 　 材料 ?、賱?dòng)物 : 雌性 SD 大鼠 40 只 ( 第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心) , 體質(zhì)量 180 ～200 g. 飼養(yǎng)溫度22 ℃,12 h 光照 ,12 h 黑暗 ,允許自由飲水和攝食 ; ②** : 17 β 2 雌二醇 ( 17 2 βestradiol , E2) : 美國(guó) Sigma 公司生產(chǎn) ; GST :第四軍醫(yī)大學(xué)**研究所 , 藥品批號(hào) :20010110. 乙酰膽堿脂酶 ( Ache) 試劑盒由南京建成生物工程研究所提供. 其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/font>.Morris水迷宮儀器，XR-XM101型，上海欣軟信息科技有限公司提供。SuperMaze動(dòng)物行為學(xué)分析軟件，由上海欣軟信息科技有限公司提供。

1 . 2 　方法

1 . 2. 1 　動(dòng)物分組制模 　 隨機(jī)分為 5 組 ,每組 8 只 : 假去勢(shì)組 ( Sham 組) ; 去勢(shì)組 ( 卵巢切除術(shù)組 , ovariecto2my , OVX) ; OVX + E 2 組 ; GST 高劑量組 ( OVX +GST 2 h) ; GST 低劑量?jī)山M ( OVX + GST 2 L ) . 適應(yīng)性飼養(yǎng) 5 d 后開始實(shí)驗(yàn). 全部大鼠在速眠新 ( 0. 3～0. 8mL/ kg) 腹腔注射麻醉下行手術(shù) , 假去勢(shì)組在開腹后去除卵巢周圍的脂肪組織后關(guān)腹 ; 其余各組行雙側(cè)OVX.

1. 2. 2 　給**法 　 術(shù)后 1 wk 開始灌胃給藥. 根據(jù)每日**處理劑量分為 5 組 : 假去勢(shì)組 ( Sham 組 , 生理鹽水 5 mL/ kg) ,OVX 組 (生理鹽水 5 mL/ kg) ,OVX+ E 2 組(400μ g/ d , E 2) ,OVX + GST 2h 組(50 mg/ kg) ,OVX + GST 2 L 組(25 mg/ kg) . 連續(xù)用藥 5 wk.

1 . 3 　行為學(xué)測(cè)試

1 . 3. 1 　實(shí)驗(yàn)條件與儀器 　  水迷宮由上海欣軟信息科技有限公司制作，材質(zhì)采用ABS工程塑料（汽車、飛機(jī)外殼材質(zhì)）模具制作，水池上空通過(guò)一攝像機(jī)和計(jì)算機(jī)相連接. 水池直徑約160cm ,深約 50cm ,預(yù)先在水池內(nèi)注入清水 , 然后加入少許墨汁 ,使水變成不透明的灰色 , 再注入清水使水面高出平臺(tái) 2 cm ,水溫控制在 22 ℃ . 以沿水池邊緣相等分布的 4 個(gè)點(diǎn)作為起始點(diǎn) ,這樣水池被分為 4個(gè)相同的象限 ( 四分之一圓) ,平臺(tái)位于某個(gè)象限的中間 ,在其他 3 個(gè)象限任選一個(gè)入水點(diǎn). 實(shí)驗(yàn)每日 2次 ,第 2 日的入水點(diǎn)與前一日采用不同的入水點(diǎn) , 每次訓(xùn)練 120 s. 若大鼠在 120 s 內(nèi)尚未找到平臺(tái) ,則將大鼠拿到平臺(tái)上并使它在上面停留 30 s ; 若大鼠在120 s 內(nèi)找到平臺(tái) ,也讓其在平臺(tái)上停留 30 s ,這樣才結(jié)束一次訓(xùn)練. 采用北京杰日歐科技有限公司研制的 Morris 水迷宮檢測(cè)軟件系統(tǒng)自動(dòng)跟蹤池內(nèi)大鼠的活動(dòng)軌跡并記錄大鼠游泳時(shí)間、游泳速度及游泳距離等參數(shù).

1. 3. 2 　結(jié)果評(píng)價(jià) 　 當(dāng)測(cè)試軟件設(shè)定的訓(xùn)練時(shí)間已到或大鼠已經(jīng)爬上平臺(tái) ,計(jì)算機(jī)停止跟蹤并記錄下游泳軌跡和自動(dòng)計(jì)算出大鼠在水池中所游過(guò)的路程 ,找到平臺(tái)時(shí)所需的時(shí)間即潛伏期. 我們以大鼠入水后找到平臺(tái)的游泳時(shí)間即逃避潛伏期 ( escape latency ,EL ) ,作為觀測(cè)指標(biāo). 120 s 內(nèi)未找到平臺(tái)的記為 120s. 連續(xù)訓(xùn)練 5 d ,第 6 日撤除平臺(tái) , 進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn) ,在原平臺(tái)象限的對(duì)側(cè)象限入水 ,記錄游泳軌跡.

1. 4 　 Ache 活性測(cè)定

1. 4. 1 　組織樣本的處理 　 大鼠結(jié)束 Morris 水迷宮試驗(yàn)后次日斷頭處死 ,在冰浴上迅速剝離大腦皮層和海馬 ,準(zhǔn)確稱取皮層和海馬 ,加入預(yù)冷的生理鹽水 ,在冰浴中用勻漿器將腦組織勻漿 , 制成 10 g/ L 的組織勻漿 ,組織勻漿經(jīng) 4000 r/ min , 4 ℃離心 20 min ,取上清液 ,移入 E ppendorf 管 , - 70 ℃保存待測(cè).Morris水迷宮對(duì)卵巢切除大鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響

1. 4. 2 　 Ache 的活性測(cè)定 　 參照試劑盒提供的試劑及方法進(jìn)行操作. 應(yīng)用 722 型紫外線分光光度儀.

1. 4. 3 　蛋白測(cè)定 　 采用 Bradfordf 法.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用 x ± s 表示 ,采用 SPSS 10. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析 ,所用統(tǒng)計(jì)方法為單因素方差分析及重復(fù)測(cè)量資料方差分析.

2 　結(jié)果

2 . 1 　去除卵巢對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響及 GST和雌**的作用

2. 1. 1 　各組大鼠 5 d 訓(xùn)練中潛伏期的變化 　 各實(shí)驗(yàn)組隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加 ,每組平均逃避潛伏期在不斷縮短 , 但各實(shí)驗(yàn)組間的逃避潛伏期無(wú)顯著性差異( P > 0. 05 , Tab 1) .

2. 1. 2 　空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果 　 撤除平臺(tái)后 , 大鼠在原平臺(tái)象限的對(duì)側(cè)象限入水 , 記錄 120 s 的游泳軌跡 ,分析大鼠在原平臺(tái)象限的記憶頻度及找到原平臺(tái)位置的游泳時(shí)間既逃避潛伏期 ,以此反映大鼠的空間記憶能力. 從 Tab 2 中可以看出 ,撤除平臺(tái)后 ,OVX 組大鼠游泳逃避潛伏期較 Sham 組較明顯延長(zhǎng) ( P <0. 05) ,其記憶頻度也較 Sham 組降低 ( P < 0. 05) ; 雌**組逃避潛伏期及記憶頻度較 OVX 組有顯著的變化 ; GST 組逃避潛伏期也較 OVX 組縮短 , 而記憶頻度也明顯增加 ( GST 2 L 組 , P < 0. 05) .