鉛是一種神經(jīng)發(fā)育毒物，它對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的正常發(fā)育以及神經(jīng)遞質(zhì)的正常分泌產(chǎn)生影響和損害[1]，故而，進(jìn)一步影響學(xué)習(xí)和記憶能力。海爾?？诜菏俏以貉兄粕a(chǎn)的保健口服液，已初步證明了其有明顯升高鉛中毒小鼠Hb含量、降低ALT活性等作用[2]。為了進(jìn)一步研究海爾?？诜簩?duì)鉛中毒所致小鼠記憶障礙的影響作用并分析其機(jī)制，我們?cè)脧?fù)雜迷宮趨食法測(cè)定小鼠記憶障礙的改善情況，結(jié)果較理想，為進(jìn)一步驗(yàn)證其療效，本文用Y型水迷宮測(cè)定小鼠的逃避潛伏期和平均逃避達(dá)標(biāo)率。有報(bào)道鉛中毒者血鉛與血鋅水平呈負(fù)相關(guān)，認(rèn)為糾正缺鋅狀態(tài)是減少腸道對(duì)鉛吸收的重要措施[3]，因此，我們嘗試用鋅**鉛中毒小鼠，觀察其改善記憶障礙的作用，并分析鋅與海爾?？诜涸?*鉛染毒所致小鼠記憶障礙中的作用關(guān)系。
1 資料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種健康雄性小鼠60只，鼠齡35天，平均體重20g。由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室（合格）提供。
1.2試劑 醋酸鉛為國(guó)產(chǎn)分析純；海爾?？诜海ㄓ摄y花、茯苓、甘草等中藥，經(jīng)水提取、乙醇沉淀等流程制成）由本院海爾福研制中心提供；葡萄糖酸鋅口服液由哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：05040331）。
1.3 Y型水迷宮測(cè)定方法 Y型水迷宮是測(cè)定小鼠辨別性記憶的*簡(jiǎn)單*常用的方法，該裝置分長(zhǎng)臂端和兩分枝短臂端。長(zhǎng)臂端長(zhǎng)40cm , 寬15 cm，短臂端長(zhǎng)30cm, 寬15 cm。長(zhǎng)、短臂高均為20 cm。左側(cè)短臂裝有平臺(tái)，供小鼠棲身，右側(cè)短臂用木板蓋上，作為暗道，水深10cm，水溫（28±0.5）℃。。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠尾對(duì)叉路從長(zhǎng)臂端輕輕放入水中，以其在10s內(nèi)直接抵達(dá)平臺(tái)為正確反應(yīng)。小鼠抵達(dá)平臺(tái)休息15s再重復(fù)訓(xùn)練，每天訓(xùn)練10次，連續(xù)5天，以每組平均正確反應(yīng)率和抵達(dá)平臺(tái)所需時(shí)間(逃避潛伏期)作為評(píng)價(jià)記憶的指標(biāo)[4]，逃避潛伏期若超過(guò)10s則以10記錄。
1.4 動(dòng)物染毒和**方法 60小鼠隨機(jī)分成5組：鋅**組、鋅加海爾福**組、海爾福**組、單純?nèi)俱U組、陰性對(duì)照組。除陰性對(duì)照組外，其余4組均用2g/L的醋酸鉛水溶液，按每克體重0.007ml劑量作腹腔注射染毒，每天1次，連續(xù)35天；陰性對(duì)照組用等體積的生理鹽水腹腔注射。染毒14天后，鋅**組用葡萄糖酸鋅水溶液灌胃，劑量按每只鼠0.02mg，每天1次；海爾福**組用海爾福口服液，劑量為每鼠0.1ml，用蒸餾水稀釋1倍后灌胃，鋅加海爾福**組用葡萄糖酸鋅加海爾福口服液混合后灌胃，劑量與鋅**組和海爾福**組相同；單純?nèi)俱U組和陰性對(duì)照組用等體積的蒸餾水灌胃，每天1次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 10.0 統(tǒng)計(jì)軟件包，進(jìn)行方差分析。
2. 結(jié)果
2.1逃避潛伏期比較 單純?nèi)俱U組的逃避潛伏期長(zhǎng)，與其他4組比較差異有顯著性（p<0.01和p<0.05）。海爾福**組和鋅**組的逃避潛伏期比鋅加海爾福**組為短，差異有顯著性（p<0.05）。從測(cè)試第1天到第5天，各組的逃避潛伏期以第1天*長(zhǎng)，然后逐漸縮短，差異有顯著性（p<0.01）。見(jiàn)表1。
表1 各組小鼠用Y型水迷宮所測(cè)的逃避潛伏期比較（X±S，S）
第1天 第2天 第3天 第4天 第天 合計(jì) |
鋅**組 4.82±0.72 3.92±0.51 3.25±0.48 3.15±0.80 2.78±0.80 3.66±0.98Δ* 鋅加海爾福**組 5.30 ±1.32 4.28±1.38 3.86±1.08 3.56±1.31 3.24±0.62 4.10±1.32# 海爾福**組 5.，Δ* 合計(jì) 5.45 ±1.29 4.18±0.89▽ 3.43±1.00▽ 3.27±0.94▽3.28±1.02▽ |
注：與單純?nèi)俱U組比較，Δp<0.01，#p<0.05；與鋅加海爾福**組比較，*p<0.05；與第1天比較，▽p<0.01。
2.2 平均逃避達(dá)標(biāo)率比較 鋅加海爾福**組和單純?nèi)俱U組的平均逃避達(dá)標(biāo)率較其他3組低，鋅**組與單純?nèi)俱U組比較，差異有顯著性（p<0.05）。從第1天到第5天，各組平均逃避達(dá)標(biāo)率總體上逐漸提高。見(jiàn)表2。
表 2 各組小鼠用Y型水迷宮所測(cè)的平均逃避達(dá)標(biāo)率比較（X±s）
第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 合計(jì) |
鋅**組 83.85±0.07 90.63±0.06 95.01±0.05 98.10±0.04 97.15±0.04 94.20±0.06# 鋅加海爾福**組 77.55±0.15 90.55±0.06 90.25±0.10 96.12±0.05 95.15±0.12 89.05±0.11 海爾福**組 73.23±0.19 88.35±0.08 96.15±0.05 100.00±0.00 97.38±0.05 91.27±0.13 單純?nèi)俱U組 77.35±0.15 88.25±0.13 90.44±0.06 92.23±0.08 96.36±0.05 88.15±0.11 陰性對(duì)照組 75.16±0.19 91.28±0.07 96.24±0.08 98.74±0.04 98.80±0.04 92.70±0.15 合計(jì) 79.46± 0.17 90.46±0.06 ▽ 93.33±0.08▽ 97.25±0.05▽ 96.36±0.06▽ |
注：與單純?nèi)俱U組比較，#p<0.05；與第1天比較，▽p<0.01。
3. 討論
本實(shí)驗(yàn)用Y型水迷宮測(cè)定小鼠的記憶能力，鋅**組和海爾福**組的逃避潛伏期比單純?nèi)俱U組短，平均逃避達(dá)標(biāo)率提高，說(shuō)明海爾?？诜汉推咸烟撬徜\均對(duì)鉛中毒所致小鼠的記憶障礙有一定改善作用，效果較好。鋅具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)金屬硫蛋白（MT）作用，MT與鉛結(jié)合可使鉛失去毒性[5]；鋅還能拮抗鉛對(duì)ALAD的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與此報(bào)道一致。海爾福口服液是由銀花、茯苓、甘草等中藥提煉而成，其中的茯苓等有較強(qiáng)抗氧化作用。而鉛致腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化是引起神經(jīng)行為改變的生物學(xué)基礎(chǔ)之一[6]，故較強(qiáng)的抗氧化成分可能是海爾福口服液**鉛中毒所致小鼠的記憶障礙的原因之一，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
各組平均逃避達(dá)標(biāo)率比較，差異不大，僅鋅**組同單純?nèi)俱U組比較，差異有顯著性。原因可能為實(shí)驗(yàn)時(shí)間較短，鉛中毒小鼠的辨別性記憶損害尚不明顯，表現(xiàn)為平均逃避達(dá)標(biāo)率的雖有提高，但各組間差異不顯著。
在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn)，鋅加海爾福**組對(duì)鉛中毒所致小鼠的記憶障礙有一定改善作用，但同鋅**組和海爾福**組的**效果比較，逃避潛伏期延長(zhǎng)，平均逃避達(dá)標(biāo)率降低，提示海爾?？诜汉推咸烟撬徜\在**鉛中毒所致小鼠的記憶障礙上可能有一定拮抗作用，其機(jī)制不詳，有待進(jìn)一步研究。
